内生菌株ペニシリウム・ベルハーゲニによって作製されたセレンナノ粒子の抗菌、抗酸化、抗がん、生体適合性、および幼虫駆除活性の探索

Scientific Reports volume 13、記事番号: 9054 (2023) この記事を引用

467 アクセス

16 オルトメトリック

メトリクスの詳細

ここでは、ニンニクの健康な根に生息する 4 つの内部寄生菌株を使用して、グリーン合成によってセレン ナノ粒子 (Se-NP) を生成しました。 Penicillium v​​erhagenii は、270 nm で最大の表面プラズモン共鳴を示し、ルビーレッドの色をした最も効率的な Se-NP 生産者であることが判明しました。 形成されたままの Se-NP は結晶性、球状で、凝集なくよく配列されており、サイズは 25 ～ 75 nm の範囲で、ゼータ電位値は -32 mV であり、高い安定性を示しています。 さまざまな病原体（大腸菌、緑膿菌、枯草菌、黄色ブドウ球菌、カンジダ・アルビカンス、C. グラブラタ、C. トロピカリス、 C. parapsilosis）、最小発育阻止濃度（MIC）は 12.5 ～ 100 μg mL-1 です。 生合成された Se-NP は、1000 μg mL-1 の濃度で 86.8 ± 0.6% の DPPH 消去率という高い抗酸化活性を示し、1.95 μg mL-1 では 19.3 ± 4.5% に低下しました。 興味深いことに、Se-NP は、正常な WI38 および Vero 細胞株との生体適合性を維持しながら、PC3 および MCF7 細胞株に対してそれぞれ IC50 が 225.7 ± 3.6 および 283.8 ± 7.5 μg mL-1 の抗がん活性を示しました。 さらに、緑色合成 Se-NP は医療用昆虫であるヒトスジシマカの齢幼虫に対して効果があり、50 μg mL-1 の濃度で最大死亡率は 85.1 ± 3.1、67.2 ± 1.2、62.10 ± 1.4、および 51.0 ± 1.0% でした。それぞれ、I、II、III、IV 齢幼虫用。 これらのデータは、さまざまな用途で費用効率が高く環境に優しい Se-NP 合成に対する内生菌株の有効性を強調しています。

セレンは微生物の繁殖にとって重要な微量元素であり、動物と人間の健康にとって必須の微量栄養素です。 その有益な特性にもかかわらず、狭い治療範囲によって支配されています。 有機および無機セレン化合物の過剰摂取は毒性を引き起こす可能性があります。 幸いなことに、セレンナノ粒子（Se-NP）は、有機および無機セレン化合物よりも毒性が低い1。 ナノマテリアル (1 ～ 100 nm) は、多くの化学的および物理的特性において独特であり、バルク材料の対応物とは区別されます。 これらの材料は、農業、環境、医療の分野で採用され、応用されています2,3。 さらに、生合成された Se-NP は、ヒトの組織や器官との適合性が高いという点で、化学的および物理的方法で製造されたものとは区別されます4。 生物学的合成経路は、植物や菌類を使用して持続可能かつ環境的に安全な方法でナノ粒子を生成することが研究されてきました5,6。 内生菌は、病理学的または有害な症状を引き起こすことなく植物の内部組織に定着する真菌、細菌、放線菌などの微生物です7。 最近、内部寄生微生物は、さまざまな形状やサイズの NP を高い安定性で製造するために使用される可能性のある活性代謝産物を効率的に生産するため、ナノ生合成の分野で出現しました。 これに関連して、内生菌類は、生成される代謝産物の量と活性の点で他の菌類種よりも優れています8。 これまでの研究では、内生菌がフラボノイド、アルカロイド、サポニン、セスキテルペン、シクロペプチド、ポリケトン、有機酸、ラクトンなどの多くの生物学的に活性な二次代謝産物を宿主植物内で達成できることが示されています。 さらに、宿主植物とその内部寄生共生生物は、抗がん作用、抗菌作用、抗 HIV 作用、抗炎症作用など、多くの生物学的特性を共有しています9。

Allium sativum L. (ニンニク) は、伝統医学の硬化剤として 4000 年以上にわたって広く使用されている多年生植物です。 エジプトのパピルスには、ヘビの咬傷、鼻炎、心臓疾患の治療にニンニクを使用するレシピが記録されています。 古代ギリシャでは、ニンニクは肺や腸の問題の治療に使用されていました。 第二次世界大戦中には、負傷者の潰瘍や傷の治療にも使用されました。 一般に、ニンニクには多くの抗真菌作用、抗菌作用、抗がん作用、抗原虫作用、降圧作用、抗凝固作用、抗けいれん作用、抗凝固作用、解熱作用、解熱作用、鎮痛作用、抗酸化作用などがあります10。

アスペルギルス・クアドリネアトゥス、アスペルギルス・オクラセウス、アスペルギルス・テレウス、およびフザリウム・エクイセティの内部寄生菌に加えて、トリコデルマ・ハルツィアヌム、アウレオバシジウム・プルランス、フォマ・グロメラータ、モルティエラ・フミリスなどのさまざまな真菌種が、Se-NPの生合成の触媒として使用されています11,12。 。 最近、ペニシリウム・シトリナム由来の菌合成 Se-NP の有望な医療応用と、抗がん剤および抗酸化剤としてのその有効性が報告されています 13。 さらに、エンドファイトPenicillium crustosumによって得られた生体Se-NPは、強力な抗癌効果と広範囲の抗菌効果（グラム陰性菌、グラム陽性菌、および4つの異なるカンジダ種に対する）およびメチレンブルー分解に対する耐久性のある触媒活性を示しました。 これらの活動は、暗い条件下よりも明るい照明下でより顕著でした14。 さらに、蚊は、ウイルス、原生動物、真菌、細菌などの人間や動物の病気の原因物質を伝染させる主な媒介者であると考えられています。 黄熱病、デング熱、フィラリア症、マラリア、チクングニア熱、西ナイルウイルス、ジカウイルスなどの致死性の病気は、蚊を媒介する病気です15。 特にグリーンアプローチによって合成された Se-NP は、人間や生態系への悪影響が低いため、高い殺蚊活性を示します 16。

したがって、現在の研究は、簡単、効率的、かつ環境的に安全な方法で Se-NP を製造する内部寄生菌の能力を調査するように設計されました。 まず、さまざまな内部寄生菌株がニンニク組織から分離され、同定されました。 Se-NP の生合成におけるそれらの可能性が調査されました。 次に、形成されたままの NP を、UV-Vis 分光法、フーリエ変換赤外 (FT-IR)、X 線回折 (XRD)、透過型電子顕微鏡 (TEM)、動的光散乱 (DLS)、およびゼータ電位を使用して特性評価しました。 最後に、それらの抗菌、抗カンジダ、抗酸化、抗癌、生体適合性、および幼虫駆除特性が調査されました。

内生菌は、活性代謝産物の生産、植物成長促進活性によるバイオ肥料としての利用、植物病原菌の制御、独特の特性を持つナノマテリアルのグリーン合成など、幅広い生物医学およびバイオテクノロジー応用を持つ重要な生物の 1 つです17,18。 。 現在の研究では、ニンニクの根が内生菌株の分離源として使用されました。 AR.1 ～ AR.4 と指定された 4 つの真菌分離株が、収集された健康な根から得られました。 これらの株は、文化的および顕微鏡的特徴付けに基づいた伝統的な方法を使用してペニシリウム属として同定されました。 (AR.1)、黒色アスペルギルス (AR.2)、アルテルナリア アルタナタ (AR.3)、およびペニシリウム sp. (AR.4) (図 1)。 同様の研究で、アスペルギルス属、アルテルナリア属、ペニシリウム属、クラドスポリウム属、チェトミウム属、およびフザリウム属に属する 12 種類の内部寄生菌株が検出されました。 は Allium sativum19 から分離されました。

Allium sativum の根から分離された真菌株の分離と一次同定。

最近、研究者は環境に優しいアプローチで新しい活性化合物を生成する傾向にあります。 これらの活性化合物の中でも、ナノマテリアルは農業、医療、工業などのさまざまな分野で高い活性を持っています20。 化学的および物理的アプローチから生じる悪影響を回避するには、環境に優しいアプローチによるこれらの材料の合成が好ましい21。 真菌、細菌、放線菌などの内部寄生微生物は、還元剤やキャッピング剤として使用される大量の活性代謝産物を分泌するため、ナノマテリアルのグリーン合成の有望な供給源と考えられています8。 現在の研究では、Se-NP の合成における内生菌株の有効性が調査されました。 金属前駆体 (Na2SO3) を菌類バイオマス濾液に添加すると、色が無色から赤色に変化し、徐々に増加しました。これは、SeO32- の還元による SeO の形成を示しています。 前の混合物を暗所に 24 時間放置して、金属が完全に還元され、それ以上色の変化がないことを確認しました。 最近、内生菌株である P. crustosum が分泌する代謝産物の作用により Na2SO3 が完全に還元されましたが、Se0 型は 24 時間のインキュベーション後に完了しました 14。 また、トリコデルマ アトロビリデによって分泌された代謝産物を使用した Na2SO3 の還元による Se-NP の作製が 24 時間後に観察され、それ以上の色の変化は認められませんでした 22。

ここでは、24時間後、形成された色の吸光度を測定して、最大表面プラズモン共鳴（SPR）を検出しました。 示されているように、インキュベーション期間は、SPR の範囲に変化がなく、色の強度にプラスの影響を示しました。 図 2 は、AR.1、AR.2、AR.3、および AR.4 の内生菌株について、それぞれ 270 nm、265 nm、265 nm、および 280 nm の波長で吸収ピークが記録されたことを示しています。 興味深いことに、最大色強度と最大 SPR 吸収ピークが AR.1 株で記録されました。 得られた結果は、真菌株によって合成された Se-NP の最大 SPR が 250 ～ 300 nm の範囲にあると報告された結果と一致しました。 例えば、75 の内部寄生菌株のうち、色の変化と 265 nm で現れる最大 SPR に基づいて Se-NP 合成に対して高い活性を示したのは、Aspergillusquadrilineatus、A. ochraceus、A. terreus、および Fusarium equiseti として同定された 4 株のみでした 11。 また、Penicillium corylophilum および内生真菌株 P. crustosum によって作製された Se-NP の最大 SPR は、それぞれ 275 および 270 nm で観察されました 14,23。

最大 SPR に基づいて最も強力な分離株を選択するために 4 つの内生菌株によって作製された Se-NP の UV-Vis 分光法。

UV-Vis分光法のデータによると、AR.1と呼ばれる内部寄生菌株が、Se-NPの緑色合成に最も強力な株として選択されました。 この株は、内部転写スペーサー (ITS) 遺伝子の増幅と配列決定に基づいて分子同定が行われ、Penicillium v​​erhagenii として同定されました (図 3)。 内生菌株 AR.1 の ITS 配列は、受託番号 OP471232 で GenBank に寄託されました。 ペニシリウムは、グリーン合成中に還元剤および安定化剤として使用されるさまざまな活性代謝物を生成する能力を備えた異なる種で構成されています 24。

最も強力な内生菌株の系統樹。

前述したように、UV-Vis 分光法を使用した色の変化とそれに続く最大 SPR の検出は、Se-NP の形成成功の最初のモニターでした。 内生菌分離株 AR.1 は、Se-NP の SPR に相当する 270 nm で最も高い色強度と吸収ピークを示しました。 これらの官能基は真菌バイオマス中に存在し、合成された Se-NP の還元および安定化における官能基の活性をフーリエ変換赤外 (FT-IR) 分析によって調査しました。 示されているように、真菌バイオマス濾液には波数 3380、2068、1634、535 cm-1 のピークが 4 つしか含まれていませんでしたが、Se-NP の場合、ピークの数は波数 3400、2880、1565、1415、 1380、920、780、512、および 410 cm-1 (図 4A)。 3380 cm-1 の強くて広いピークは、タンパク質とアミノ酸の O-H および NH グループと N-H グループに起因する可能性があり 25,26、このピークは Se-NP では 3400 cm-1 にシフトしました。 2068 cm-1 の幅のピークは、内生菌株によって分泌される炭水化物部分に関連しています。 さらに、1634 cm-1 のピークは、バイオマス濾液に存在する多糖の伸縮性 NH 基と重なっているカルボニル (C=O) 基に対応します4。 このピークは、Se-NP の緑色合成後に 1565 cm-1 にシフトしました。 バイオマス濾液の 535 cm-1 のピークは、ハロー化合物の C-l の伸張に起因すると考えられます。 Se-NP の FT-IR チャートにおける他のピークの存在は、形成されたままの Se-NP の還元およびキャッピング中のバイオマス濾液中の代謝産物と亜セレン酸ナトリウム間の相互作用に関連している可能性があります。 2880 cm-1 の中程度のピークはアルカンの C-H 伸縮を示しますが、1380 ～ 1420 cm-1 の範囲の中程度のピークはカルボン酸の O-H の屈曲に対応している可能性があります 27,28。 400 ～ 800 cm-1 の範囲のピークは、Se-NP とカルボニル基の反応から生じる Se-O の曲げおよび伸縮に対応し、最終的には凝集と凝集を防ぐ Se-NP 表面の周囲にコーティング層を形成します。以前に報告したように29。 FT-IR 分析に基づくと、タンパク質、多糖類、炭水化物、アミノ酸などの真菌バイオマス濾液中のさまざまな代謝産物の存在は、亜セレン酸ナトリウムを還元して Se-NP を形成し、その後、亜セレン酸ナトリウムの還元を強化するコーティングを形成する際に重要な役割を果たしていることがわかりました。 NP の安定性を高め、凝集を防ぎます。

FT-IR (A) および XRD (B) を使用した、合成された Se-NP の特性評価。

形成されたままの Se-NP の結晶構造を X 線回折 (XRD) 分析によって調査しました (図 4B)。 示されているように、XRD パターンは、(100)、(101)、(110)、(102)、(111)、(201)、(112)、および (202) の 8 つの吸収ピークを示し、2θ 値でのブラッグ回折と一致しました。それぞれ23.5°、29.3°、41.3°、45.51°、52.53°、55.71°、62.74°。 得られた XRD パターンは、JCPDS 標準カード No. 06-0362 に従って Se-NP の結晶構造を確認したものと照合されました。 得られた XRD パターンは、Se-NP のグリーン合成に関する公表された研究と一致します 14、30、31。 XRD チャートに追加のピークがないことは、合成された Se-NP の純度が高いことを示しています (EDX スペクトルで検証)。 Se-NP の平均結晶子サイズは、デバイ・シェラー方程式を使用した XRD 分析に基づいて計算され、55 nm でした。 最近の研究では、4 種類の内部寄生菌菌株、Aspergillus quadrilineatus、A. ochraceus、A. terreus、および Fusarium equiseti によって作製された平均結晶子サイズは、XRD 分析に基づいてそれぞれ 55.4、45.2、30.9、および 30.1 nm と計算されました 11。

サイズ、形状、凝集などの真菌媒介合成 Se-NP の形態学的特徴は、生物活性に影響を与える主要な要因であることが、透過型電子顕微鏡 (TEM) 分析によって調査されました。 図 5A および B は、凝集することなくよく配置され、サイズが 25 ～ 75 nm の範囲にあり、平均サイズが 44.1 ± 15.4 nm である合成 Se-NP の球形を示しています。 アシネトバクター属の代謝産物を利用して1.5 mMの濃度で形成されたSe-NPのTEM画像。 SW30 は、サイズ 78 nm の球形の作製に成功したことを示しました32。 さまざまな用途における NP の組み込みは、主にキャッピング剤、表面電荷、形状、サイズ、凝集などのさまざまな要因に依存します 21。 サイズが小さくなるにつれて、活動は増加しました。 例えば、Pantoea agglomerans のバイオマス濾液によって合成された Se-NP は、サイズが小さいほど高い抗酸化活性を示しました 33。 また、NP の活性は形状によって異なります。 例えば、Se-NP は立方体形状では高い抗酸化活性を示し、球状形状では高い抗菌活性を示しました 34。

(A) 球形の形状、(B) サイズ分布、(C) 動的光散乱、および (D) 内生真菌株 P. verhagenii によって作製された Se-NP のゼータ電位解析を示す透過型電子顕微鏡。

コロイド溶液中の真菌ベースの Se-NP のサイズは、動的光散乱 (DLS) によって検出されました。 示されているように、合成された Se-NP の平均流体力学的サイズは 91.2 nm でした (図 5C)。 現在の研究では、DLS によって得られた平均サイズは、TEM や XRD によって得られたものよりも大きくなっています。 この発見は、TEM が固体状態の直径を計算するのに対し、DLS は流体力学的残留物 (水和状態) を測定することに起因すると考えられます。 また、DLS はコーティング剤や不均一な分布の影響を受け、サイズが大きくなります 36,37。 同様の研究では、TEM によって得られた Se-NP の平均粒子サイズは 15 ～ 40 nm でしたが、DLS によって得られた平均粒子サイズは 20 ～ 60 nm でした 4。これは粒子の周囲の流体力学的コーティングによって説明されます。

合成された Se-NP の安定性は、NP の表面の電荷を測定するゼータ電位によって調査されました。 現在の研究では、真菌ベースの Se-NP は、高い安定性を示す -32 mV のゼータ電位値を持っています (図 5D)。 同様に、カリカパパイヤの水抽出物によって作製された Se-NP のゼータ電位値は -32 mV 38 でした。 今回の研究で作製された Se-NP の安定性は、粒子間の負の静電力を増加させ、分散を高める負電荷の存在に起因すると考えられます。 また、NP の安定性はゼータ電位の値に応じて次のように分類できます。値が ± 0 ～ 10、± 10 ～ 20、± 20 ～ 30、˃ ± 30 の場合はそれぞれ不安定、中安定、安定、および高安定です 39。 。 さらに、NP 表面に二重電荷 (正と負) が存在せず、単一電荷 (負) が存在することにより、粒子間の分散液が凝集を避けるために同じ電荷を帯びるため、安定性が向上する可能性があります。 Dhanjal と Cameotra40 は、同じ溶液中で一部の粒子の表面に正電荷が存在し、他の粒子に負電荷が存在すると、粒子の凝集が促進されることを報告しました。

世界中の死亡率または罹患率のほとんどは微生物感染症が原因です。 抗生物質の乱用により細菌感染症は日々増加しており、抗生物質耐性株の出現につながっています6,41。 さらに、カンジダ株は日和見真菌であり、口腔カンジダ症、カンジダ血症、膣炎、全身性感染症、免疫不全患者における皮膚カンジダ症などの感染症の最も一般的な病原体であると考えられています42。 したがって、これらの課題を克服するには、安全で費用効果の高い新しい活性化合物を構築することが重要です。 セレンイオンは抗菌剤としての有効性を示し、その有望な抗真菌活性により、以前はフケ防止シャンプーの添加剤として使用されていました43。 残念ながら、哺乳動物細胞に対する毒性のため、それらは少量しか使用されていません38。 したがって、研究者らは、それらをナノスケールに変換することで毒性を軽減することに焦点を当てました。

現在の研究では、大腸菌、緑膿菌、枯草菌、黄色ブドウ球菌に代表される病原性細菌のほか、C. albicans、C. glabrata と呼ばれるさまざまな病原性カンジダ種の増殖を阻害する緑色合成 Se-NP の活性が確認されました。 、Ｃ．トロピカリス、およびＣ．パラプシロシスをウェル拡散法により調査した。 データ分析により、Se-NP の抗菌活性は濃度依存性であることが示されました。 得られた発見は、公開されている文献と一致しました。 たとえば、Ceropegia bullosaの水性抽出物中の代謝産物の作用によって形成されたSe-NPは、100 μg mL-1でB. subtilisおよびE. coliに対して高い抗菌活性を示し、その後75、50、および25 μgの濃度で示されました。 mL-116。 現在の研究では、最高の抗菌および抗カンジダ活性は 400 μg mL-1 で記録され、阻害ゾーンは 15.7 ± 0.6、15.3 ± 0.6、20.7 ± 0.7、18.3 ± 0.6、18.3 ± 0.6、17.7 ± 0.5、17.3 でした。 B. 枯草菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、大腸菌、C. アルビカンス、C. トロピカリス、C. グラブラタ、および C. パラプシロシスムでは、それぞれ ± 0.5、および 16.7 ± 0.6 mm (図 6A、B)。 低濃度では、合成物 200 µg mL-1 で 12.3 ± 0.6、11.7 ± 0.5、16.7 ± 0.7、14.0 ± 0.0、12.3 ± 0.6、14.0 ± 0.0、13.0 ± 1.0、および 12.7 ± 0.6 に活性が低下しました。サイズ Se-上記の試験生物の同じ配列の NP。 Withania somniferaの葉水抽出物によって形成されたままのSe-NPは、B. subtilis、S. aureus、およびKlebsiella pneumoniaeに対してそれぞれ14.0 ± 0.0、19.7 ± 0.6、および12.0 ± 0.0 mmの阻害ゾーンで抗菌活性を示しました。大腸菌に対する活性はありません6。 また、Penicillium corylophilum のバイオマス濾液によって作製された Se-NP は、グラム陽性菌 (枯草菌および黄色ブドウ球菌) およびグラム陰性菌 (緑膿菌および大腸菌) に対して広範な抗菌活性を示しました 23。

異なる濃度でのグラム陽性菌およびグラム陰性菌 (A) および単細胞真菌 (B) に対する P. verhagenii の内生菌株によって作製された Se-NP の抗菌活性。 同じ濃度での異なる文字は、データが有意な差であることを示します (p ≤ 0.005) (n = 3)。

最小発育阻止濃度 (MIC) は、微生物の増殖を阻害する効果がある最低濃度です。 生物医学分野に組み込まれる生理活性化合物の選択は、MIC 値の評価に依存します44。 ここで、合成された Se-NP は、生物に基づいてさまざまな MIC 値を示しました。 例えば、グラム陽性菌の MIC 値は 50 μg mL-1 でしたが、グラム陰性菌、緑膿菌、大腸菌の MIC 値はそれぞれ 12.5 μg mL-1、25 μg mL-1 でした（図 6A）。 一方、試験した単細胞真菌の MIC 値は 50 ～ 100 μg mL-1 の範囲でした (図 6B)。 最近、カンジダ種に対する緑色合成 Se-NP の MIC 値は、種の種類に応じて 25 ～ 200 μg mL-1 の範囲になるように変化しました 14。 また、抗菌活性とMIC値は生合成アプローチによって異なりました。 例えば、Aspergillusquadrilineatus および A.ochraceus によって合成された Se-NP の大腸菌に対する MIC 値は 62.5 μg mL-1 でしたが、A. terreus および Fusarium equiseti11 によって製造された Se-NP の MIC 値は 250 μg mL-1 でした。 この発見は、ナノ材料の安定化に重要な役割を持つ微生物または植物によって分泌されるキャッピング剤に起因すると考えられます8,45。 得られたデータに基づいて、内生真菌株 P. verhagenii によって形成されたままの Se-NP は、病原性細菌およびカンジダ属菌に対して高い抗菌活性を示しました。

Se-NP の抗菌活性は細胞壁構造に関連している可能性があります。細胞壁構造は、グラム陰性株の薄い層と比較して、グラム陽性株ではペプチドグリカンの厚い層で構成されています。 この違いは、細胞内の NP の拡散に影響を与える可能性があります。 厚いペプチドグリカン層は、Se-NP の拡散を防止または遅延させることができ、その結果、グラム陽性菌に対する抗菌活性がグラム陰性菌よりも低くなります 46。 グラム陽性菌に対する活性は、グラム陽性菌よりもグラム陰性菌に多量に存在するリポ多糖の負電荷に対する Se-NP の高い静電反発力に起因すると考えられます。 これにより、グラム陽性株の表面に Se-NP が大量に沈着し、最終的に細胞死が引き起こされます 47。 Se-NP の別の抗菌メカニズムは、微生物細胞への侵入時の活性酸素種 (ROS) の生成である可能性があります。 H2O2、O2•–、および•OH などの ROS は、細胞質膜の選択的透過機能を破壊し、細胞内のストレスを増大させ、DNA 複製の阻害、タンパク質合成の破壊、および正常な細胞代謝の阻害につながる可能性があります。 これらすべての機能不全は細胞死につながります48,49。

興味深いことに、真菌を介した Se-NP の緑色合成は、カンジダのさまざまな株に対して高い活性を示しました。 この発見は、エルゴステロール生合成経路を阻害することによってカンジダ細胞壁のステロールプロファイルを破壊するその活性に関連している可能性があります50。 また、カンジダ細胞壁上への Se-NP の高度な蓄積は、Se とメチオニンやシステインなどの含硫アミノ酸との反応を引き起こします51。 この相互作用の結果として、S-Se-S という新しい構造が形成され、タンパク質の構造が変化し、その触媒機能がブロックされます 52。

緑色合成 Se-NP によるフリーラジカルの消去活性を、コントロール (アスコルビン酸) と比較して DPPH 法によって調査しました (図 7)。 データ分析により、フリーラジカル消去活性は濃度に依存する性質があることが示されました。 活性は、緑色に合成された Se-NP の濃度に直接比例します。 得られた知見は、植物、菌類、放線菌によって製造された Se-NP の除去活性がそれらの濃度に依存することを報告した公表文献と一致しました 4,11,53。 最大の DPPH 消去活性は、1000 μg mL-1 で 86.8 ± 0.6% のパーセンテージで記録されました。これに対し、同じ濃度のアスコルビン酸では 97.3 ± 0.2% のパーセンテージが記録されました (図 7)。 DPPH 消去活性は、Se-NP の最低濃度 1.95 μg mL-1 で 19.3 ± 4.5% に達しました。 これは、合成された Se-NP が低濃度で抗酸化活性を有することを示しています。 同様の研究では、A.quadrilineatus、A.ochraceus、A.terreus、およびF.equisetiの内生菌株によって作製されたSe-NPは、93.8±9.5、83.6±6.3、79.2±9.3、アスコルビン酸の 100% 除去活性と比較して、1000 µg mL-1 ではそれぞれ 79.8 ± 4.7% でした。 これらのパーセンテージは、同じ濃度のコントロール（21.3 ± 1.5%）と比較して、25 μg mL-1 の濃度で 25.8 ± 2.1、28.4 ± 2.6、18.0 ± 3.5、および 10.3 ± 2.1% に達しました11。 現在の研究では、EC50 (フリーラジカルの 50% を除去する有効濃度) の値は、Se-NP とアスコルビン酸でそれぞれ 28.7 ± 1.6 μg mL-1、5.4 ± 0.8 μg mL-1 でした。 我々のデータは、真菌株Monascus purpureusのバイオマス濾液によって合成されたSe-NPのEC50が85.9μg mL-154であったという記録と一致せず、ここで合成されたSe-NPの有望な抗酸化活性を示しています。

対照としてのアスコルビン酸と比較した、内生菌P. verhageniiによって合成されたSe-NPのDPPH消去活性。

抗酸化物質またはフリーラジカルスカベンジャーは、病原体、汚染物質、放射性物質、毒素などのストレス下で合成される不安定な分子またはフリーラジカルによって引き起こされる細胞損傷を防止する物質です55。 これらのフリーラジカルの主な症状は、リウマチ、免疫機能不全、パーキンソン病、白血病、心臓発作、代謝障害、呼吸不全です56。 これらのフリーラジカルスカベンジャーの起源は、フェノール類、フラボノイド、植物エストロゲン、タンニンなどの天然源、またはナノマテリアルなどの合成源のいずれかです。 金属および金属酸化物のナノ粒子は、フリーラジカル捕捉剤としての能力によって特徴付けられます 33,56。 抗酸化物質としての Se-NP の活性は、生体内条件下でフリーラジカルの悪影響から細胞を保護するグルタチオンペルオキシダーゼなどのセレノ酵素の活性化における Se-NP の効果に起因すると考えられます 4,45。 また、NP の抗酸化物質は、電子移動による DPPH フリーラジカルの形成の阻害と中和によるものである可能性があります 57。 さらに、NP の独特の特性、特に高い表面対サイズにより、抗酸化活性を高めることができます 58。

緑色合成 Se-NP の抗がん活性は、MCF7 および PC3 と呼ばれる 2 つのがん細胞に対して調査され、一方、生体適合性は、Vero および WI38 として示される 2 つの正常細胞に対して評価されました。 Se-NPs 処理による細胞生存率と細胞増殖は、MTT アッセイ法によって評価されました。 データ分析により、内生菌株を介した Se-NP の緑色合成は、濃度に基づいて、試験した癌細胞株に対して有望な抗癌活性を有することが示されました。 低濃度 (≤ 62.5 µg mL-1) では、Se-NP はがん細胞株や正常な細胞株の生存率 (全細胞の細胞生存率が 89 ～ 99% の範囲) に大きな影響を与えません。濃度 125 μg mL-1 の場合、PC3 の生存率は、MCF7 の癌細胞株 (99.6 ± 3.2%) および 2 つの正常細胞株 (Vero および WI38 の 98.4 ± 3.1% および 99.9 ± 1.2%) と比較して、89.7 ± 0.9% でした。それぞれ）（図8）。 Se-NP 濃度を 500 μg mL-1 に増加させると、癌性細胞株の生存率は大幅​​に低下し、正常細胞株の生存率 (44.4 Vero と WI38 ではそれぞれ ± 0.7% と 43.1 ± 0.9%)。 得られた結果と一致して、植物合成 Se-NP の活性は、MCF-7、Caco-2、IMR-32、および正常細胞株 Vero38 のがん細胞株に対する濃度に依存していました。 また、アシネトバクター属の代謝物を利用して合成された Se-NP の抗増殖活性も調べられました。 4T1、MCF7、NIH/3T3、および HEK293 に対する SW30 は濃度依存性でした 32。 データ分析により、真菌を介したSe-NPの緑色合成の毒性は、MCF7と比較してPC3に対して最も高いことが示された（図8）。 一方、さまざまな濃度の Se-NP に対する 2 つの正常細胞の感受性は同様でしたが、250 μg mL-1 では WI38 の生存率が Vero 細胞と比較して低下しました。

MTT アッセイ法を使用した、さまざまな濃度の Se-NP で処理した後の癌細胞 (PC3 および MCF7) および正常細胞 (Vero および WI38) の細胞生存率。

Se-NP の IC50 (細胞生存率の 50% を阻害する濃度) は、PC3、MCF7、WI38、および Vero 細胞で 225.7 ± 3.6、283.8 ± 7.5、454.8 ± 29.9、および 472.8 ± 5.8 µg mL-1 と評価されました。それぞれの行。 得られたデータは、正常な細胞株と比較して、低濃度での癌性細胞株に対する Se-NP の標的配向を明らかにします。 この発見により、生物医学分野で Se-NP を 300 μg mL-1 未満の濃度で組み込むと、正常細胞への影響は無視できる程度でがん細胞に対してより活性が高まることが確認されました。 以前に報告されているように、正常細胞に対する合成 Se-NP の最小の細胞毒性効果は、正常な酸化還元バランスに関連している可能性があります 59。

Se-NPで処理した細胞の顕微鏡検査では、高濃度下で上皮細胞の単層が完全または部分的に破壊されたことが示されました（補足データ、図S1、S2、S3、S4を参照）。 さらに、これらの濃度では、細胞が丸くなったり粒状になったり、縮小したり、浮力が生じたり、総数が減少したりする傾向があります。 これらの悪影響は、特に正常細胞の場合、低濃度で減少しました。 サイズが小さいことが、哺乳動物の細胞膜を透過し、タンパク質、核酸、アミノ酸などの細胞成分と相互作用して細胞機能不全を引き起こす効果があるため、細胞傷害活性の理由となります60。 さらに、細胞内に Se-NP が存在すると、ミトコンドリアに悪影響を及ぼし、最終的にはアポトーシス死に至る ROS の生成が増加する可能性があります 14。 Shiny らは、肺癌細胞 (A549) を銀および白金のナノ粒子に曝露すると、細胞骨格が破壊され、その結果、細胞の溶解を担う細胞質ゾル LDH 酵素と呼ばれる特定の酵素が放出されると報告しました60。

蚊を媒介する蚊を制御するための化学物質の使用は、人間の健康だけでなく、環境や新たな耐性媒介生物の出現にも悪影響を及ぼしました61。 したがって、安全で環境に優しく、費用対効果が高く、即効性のある活性化合物の構築が急務となっています。 ここで、真菌ベースの Se-NP は、さまざまな濃度（10、20、30、40、および 50 μg mL-1）でヒトスジシマカの異なる齢幼虫（I、II、III、IV）に対して高い死亡率を示しました（表） 1)。 示されているように、齢幼虫に対する Se-NP の活性は濃度依存性でした。 得られた発見は、蚊媒介物質に対する緑色合成ナノマテリアルの効果に関する文献と一致していた 62,63。 データ分析の結果、1 齢幼虫の最高死亡率 (85.1 ± 3.1%) は 50 μg mL-1 の濃度で記録されたが、濃度を下げることでこの割合は減少し、10 μg mL-1 では 59.0 ± 2.0% に達したことが示されました。 1. 一方、形成されたままの Se-NP は、IV 齢幼虫に対して高い活性を示し、10 ～ 50 の濃度で死亡率 31.3 ± 1.5、34.1 ± 0.0、42.2 ± 1.0、46.2 ± 1.6、および 51.0 ± 1.0% でした。それぞれμg mL–1。

分散分析の結果、ヒトスジシマカの I、II、III、および IV 齢幼虫の LC50 と LC90 は、(15.2、33.6、45.5、および 54.3 μg mL-1) および (132.8、138.9、142.4、および 180.3 μg) であることが明らかになりました。 mL–1)、それぞれ (表 1)。 同様の研究では、ヒトスジシマカの幼虫に対する植物ベースの Se-NP の LC50 と LC90 は、それぞれ (15.2 ～ 52.3 mg L–1) と (132.7 ～ 178.3 mg L–1) の範囲でした16。 Clausena dentata の葉水抽出物によって作製された Se-NP は、Culex quinquefasciatus、Aedes Aegypti、および Anopheles stephensi に対してそれぞれ 99.6、104.1、および 240.7 mg L-1 の LC50 値で幼虫駆除活性を示しました64。

Se-NP の albopictus に対する活性は、細胞膜を透過し、機能不全を引き起こすさまざまな細胞成分と相互作用する Se-NP の有効性に起因すると考えられます 16。 また、細胞内に Se-NP が存在すると酸化ストレスが増加し、有毒な ROS が生成されて最終的に細胞死に至る可能性があります。 さらに、Se-NP はアミノ酸またはリン含有核酸の -SH 基と反応して細胞を破壊する可能性があります 65。

健康な植物からニンニク (Allium sativum L.) の根を収集し、真菌内部寄生菌の分離源として使用しました。 私たちの仕事は、制度的、国家的、国際的なガイドラインと法律に準拠しています。 ニンニクは世界中で一般的であり、IUCNによれば、私たちが扱っている種は危険性や風土病ではない国際作物であるため、許可やライセンスは必要ありません。 根のサンプルは、エジプトのエルメノフィア県（北緯30度38分40.9秒、東経30度56分49.9秒）の農地から、同県の地元農業局の許可（番号：EM2/2022）のもとで収集されました。 健康なニンニク植物の根を収集し、アイスボックスを使用して研究室に移す前に、滅菌ポリエチレン袋に保管しました。 サンプル収集中に、5 つの個別の植物が得られ、各植物から 3 つの個別の根が収集されました。

収集した根を水道水で 3 回洗浄して付着粒子を除去し、その後滅菌蒸留水で洗浄します。 その後、滅菌蒸留水 60 秒、エタノール (70%) 30 秒、次亜塩素酸ナトリウム (2.5%) 4 分、エタノール (70%) の順に根を浸漬して表面殺菌を行った。 ）30秒間放置し、最後に滅菌ディス液で根を洗浄します。 H2O。 表面の滅菌プロセスを確認するには、滅菌済みのディスクを使用します。 最後の洗浄で得た水を、さまざまな微生物の増殖に適した寒天培地（細菌には栄養寒天、真菌には Czapek Dox、放線菌には硝酸デンプン）に接種しました。 接種したプレートを適切な条件でインキュベートし、微生物の増殖をチェックするために毎日観察しました。 接種した寒天培地に微生物の増殖がないことは、表面滅菌プロセスが成功したことを示しています。

滅菌した根を小さなセグメント（4 mm/セグメント）に切断し、個々の植物あたり 10 部分を、細菌の増殖を抑制するためにクロラムフェニコールを補充した Czapek Dox 寒天プレート（5 セグメント/プレート）の表面に置きました。 プレートを 25 ± 2 °C で 15 日間インキュベートし、植物内部組織からの真菌の増殖の様子を確認するために毎日観察し、採取して新しいプレートに再接種しました。 精製された真菌分離株は、ペニシリウム属 66、アスペルギルス属 67、およびアルテルナリア属 68 の標準キーに従って、形態学的および文化的特徴に基づいて同定されました。

Se-NP を作製するための生体触媒として作用する、単離された内部寄生菌株の有効性が調査されました。 各真菌株からの 1 つのディスク (10 mm) を 100 mL の Czapek Dox ブロス培地に個別に接種し、振盪条件 (150 rpm) で 25 ± 2 °C で 7 日間インキュベートしました。 インキュベーション期間の終わりに、Whatman No.1を使用して接種したブロス培地を濾過することによって真菌バイオマスを収集し、滅菌ディスケットで3回洗浄した。 H2O で付着したメディア成分を除去します。 各真菌株について収集した約 7 g のバイオマスを 100 mL のディスペンサーに懸濁しました。 H2O に溶解し、25 ± 2 °C で 24 時間インキュベートした後、遠心分離してバイオマス濾液を収集し、これを次のように Se-NP の作製に使用しました。85.5 mg の金属前駆体 (Na2SO3) を 10 mL のディストリビュータに溶解しました。 H2Oを90 mLの真菌バイオマスに添加して、最終濃度5 mMを得ます。 混合物を４０℃で１時間撹拌し、１Ｎ ＮａＯＨを使用してｐＨを８に調整した後、暗条件下、室温で一晩放置した。 無色からルビーレッドへの色の変化は、Se-NP の形成を示し、続いて 200 ～ 700 nm の範囲の波長でその吸光度を測定して、最大表面プラズモン共鳴 (SPR) を検出します 31。 金属前駆体を含まない真菌バイオマス濾液を対照として使用した。 最も強力な真菌株は、最高のルビーレッド色と最大の SPR 値を形成するその有効性により選択されました。 結果物を回収し、ディスで３回洗浄した。 200 °C で 4 時間オーブン乾燥する前に H2O。

AR.1 として指定される、選択された最も強力な内生菌分離株を、White らのプロトコールに従って ITS 遺伝子の増幅および配列決定を通じて分子同定した69。 ITS遺伝子は、ITS1（5' CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3'）およびITS4（5' TCCTCCGCTTATTGATATGC 3'）のプライマーを使用して増幅した。 以下を含む PCR 混合物: 0.5 mM MgCl2、PCR バッファー、2.5 U Taq ポリメラーゼ (QIAGEN、GERMANTOWN、MD-20874、USA)、0.5 μM の各プライマー、2.25 mM dNTP、抽出されたゲノム DNA (5 ng)。 実行は DNA Engine Thermal Cycller (PTC-200、BIO-RAD、米国) を使用して行われ、94 °C で 3 分間調整した後、94 °C で 30 分間、55 °C で 30 分間を 30 サイクル行いました。 72 °C で 1 分間、最後に 72 °C で 10 分間。 PCR産物はアガロースゲル(1%)を使用してチェックした後、GATC Biotech [エジプト、カイロのSigma AldrichのパートナーとしてDNAシーケンサー(ABI-3730xl)を使用している会社]で配列決定しました。 得られた配列は、ClustalX 1.8 ソフトウェア パッケージ (http://www.clustal.org/clustal2) によって GenBank に寄託されたデータベースによって比較されました 70,71。 系統解析は近隣結合法 (MEGA v6.1) ソフトウェアを使用して実行され、ブートストラップ解析 (1000 回の繰り返し) によって信頼性がテストされました。

フーリエ変換赤外 (FT-IR) (Cary-660 モデル) を使用して、真菌バイオマスおよび形成されたままの Se-NP のさまざまな官能基を検出しました。 この分析では、10 mg の合成 Se-NP を KBr と混合し、プレスしてディスクを形成し、400 ～ 4000 cm-122 の範囲の波長でスキャンしました。 真菌を介した Se-NP の緑色合成の結晶構造は、X 線源 (λ = 1.54 Å) として CuKα 電極を含む X 線回折 (XRD、PANalytical-X'Pert-Pro-MRD) によって評価されました。 解析は、2θ 値 10°～80°の範囲で、それぞれ 30 mA と 40 kV の電流と電圧で実行されました。 結晶子サイズは、次のようにデバイ・シェラー方程式による XRD 分析に基づいて計算されました。

ここで、K はシェラー定数 (0.94)、λ は X 線の波長 (1.54)、β は回折ピークの半値全幅、θ は回折角です。

形態学的特徴（形状およびサイズ）は、透過型電子顕微鏡（TEM、日本電子株式会社-1010、東京、日本）によってチェックされました。 緑色の合成 Se-NPs 粉末を超音波処理下で H2O に懸濁し、TEM-カーボン グリッド上に数滴加えました。 装填されたグリッドは、分析にかける前に乾燥させておきました 72,73。

動的光散乱 (DLS) (Nano-ZS、Malvern Ltd、Malvern、UK) を使用して、コロイド溶液内のサイズ分布を調査しました。 合成された Se-NP は、散乱解析中に信号に影が現れるのを防ぐために、高純度溶媒 (MiliQ H2O) に分散されました。 さらに、合成された Se-NP の表面電荷は、Zeta-sizer 装置 (Nano-ZS、Malvern、UK) を使用して評価されました 74。

抗菌剤としての真菌ベースの Se-NP の活性は、大腸菌 ATCC8739、緑膿菌 ATCC9027 (グラム陰性菌)、枯草菌 ATCC6633、および黄色ブドウ球菌 ATCC6538 (グラム陽性菌) を含む病原性微生物のグループに対して研究されました。 また、エジプト・ギザの国立研究センター微生物研究所から収集されたC. albicans、C. glabrata、C. Tropicalis、およびC. parapsilosisとして指定される臨床カンジダ株のグループに対して活性を評価しました。 抗菌活性は、寒天ウェル拡散法を使用して評価されました75。 この方法では、選択した細菌株と真菌株を、栄養寒天プレート (既製、Oxoid) およびサブローブドウ糖寒天プレート (gL-1 を含む: ブドウ糖、40、ペプトン、10、寒天、15) 上でそれぞれ一晩継代培養しました。 35±2℃。 その後、各微生物からシングルコロニーをピックアップし、滅菌綿棒でミュラーヒントン寒天プレート（レディプレパレーション、Oxoid）の表面に均一に広げ、各プレートに4つのウェル（直径0.6 mm）を作成しました。 これらのウェルには、調製した Se-NPs 溶液 100 μL (400、300、200、100、50、25、12.5、および 6.25 μg mL-1) を充填しました。 溶媒システム (DMSO) を対照として実験を実行しました。 充填したプレートを 35 ± 2 °C で 24 時間インキュベートしました。 インキュベーション時間の終わりに、結果は各ウェルの周囲に形成された透明ゾーンの直径として記録されました。 微生物の増殖を阻害する最低の Se-NP 濃度 (MIC 値) を決定しました。 実験は３回繰り返して行われた。

真菌を介した Se-NP の生合成の抗酸化活性は、DPPH (2,2-ジフェニル-1-ピクリルヒドラジル) 法によって評価されました。 この方法では、さまざまな濃度の生合成 Se-NP (1.95 ～ 1000 μg mL-1) を高純水 (Milli-Q H2O) 中で調製しました。 その後、調製した溶液 1 mL を、1 mL の DPPH (メタノールで調製) と 450 μL の Tris-HCl 緩衝液 (pH 7.4、50 mM) を含む試験管に加え、よく混合した後、37 °C で 1 分間インキュベートしました。暗所で振とう条件（100 rpm）で 30 分間放置します。 アスコルビン酸（陽性対照）を使用した別の一連の実験を、同じ条件/濃度下で実施した。 また、Se-NP またはアスコルビン酸の非存在下での DPPH および Tris-HCl バッファーであるネガティブコントロールを使用して、同じインキュベーション条件下で実験を実行しました。 インキュベーション期間の終わりに、形成された色の吸光度を 517 nm で測定しました。 フリーラジカル消去率は、次の式 6 を使用して計算されました。

ここで、AbC と AbT はそれぞれコントロール (アスコルビン酸) と処理 (Se-NP) の吸光度です。

MCF7 (ヒト乳がん) および PC3 (前立腺がん細胞) と呼ばれる 2 つのがん細胞と、Vero (サル腎臓上皮細胞) および WI38 (ヒト肺線維芽細胞) に代表される 2 つの正常細胞は、生物由来製品の持株会社から購入されました。およびワクチン（VACSERA）、カイロ、エジプト。

2 つの癌細胞 (MCF および PC3) に対する Se-NP の抗癌活性と 2 つの正常細胞 (Vero および WI38) に対する生体適合性試験を、MTT アッセイ法を使用して評価しました。 この方法では、各細胞タイプを 1 × 105 細胞/100 μL/ウェルの強度で 96 ウェル組織培養プレートに接種し、5% CO2 インキュベーター内で 37 °C で 24 時間インキュベートしました。 単層シートが形成されたら、洗浄媒体で 2 回リンスし、2% 血清を含む RPMI 維持媒体 100 μL を加えました。 その後、増殖中の細胞を 2 倍濃度の Se-NP (31.25 ～ 1000 μg mL-1) で処理し、48 時間インキュベートしました。 Se-NP を含まない 3 つのウェルをコントロールとして使用しました。 インキュベーション期間後、各ウェルに残った培地を廃棄し、50 μL の MTT 溶液 (5 mg mL-1 のリン酸緩衝食塩水) を加え、5 分間十分に振盪した後、37 °C で 4 時間インキュベートしました。 完全なインキュベーション期間後、MTT 溶液を廃棄し、100 μL の DMSO (10%) を加え、30 分間振盪して形成されたホルマザン結晶を溶解しました。 形成された色の吸光度は、ELIZA リーダー 76 によって 570 nm で測定されました。 Se-NPs 処理による細胞の形態学的変化は、倒立顕微鏡 (Nikon、ECLIPSE Ts2、新宿、東京、日本) を使用して観察され、細胞生存率は次の方程式によって計算されました。

ここで、AbT と AbC はそれぞれ治療とコントロールの吸光度です。

ヒトスジシマカの幼虫の殺虫における Se-NP の有効性が調査されました。 ヒトスジシマカ蚊の幼虫は、エジプト、ギザの医療昆虫学センターから入手しました。 収集した幼虫は、脱イオン水を満たしたプラスチックカップに入れて実験室条件下で保存した。 酵母とドッグフードの混合物 (1:1 w/w) を幼虫の餌として使用しました。 実験は相対湿度 70%、30 °C、光周期 12:12 時間 (暗/明) の条件で実施されました。 実験は WHO ガイドライン 77 の基準に従って実施されました。 この方法では、各齢 (I、II、III、および IV) からの 25 匹の健康な幼虫を、Se-NP 濃度 (50、40、30、20、および 10 μg) と混合した 200 mL の水道水を含む容器内で別々に培養しました。 mL–1) で 48 時間。 Se-NP を含まない水道水を入れた容器を対照として使用しました。 容器の撹乱後に幼虫が水道水面に到達する能力を失った場合、幼虫は死亡したとみなした。 死亡率は次の方程式を使用して計算されました。

ここで、A は対照群の死亡率、B は治療群の死亡率です。 実験は、Se-NPs 濃度ごとに 5 回繰り返して実行されました。

統計パッケージ SPSS v17 を使用して取得したデータを分析し、3 つの独立した反復によって表しました。 t 検定または ANOVA に続いて p < 0.05 での Tukey HSD 検定を使用して、治療間の差異を測定しました。 幼虫の死亡率はプロビット分析によって測定され、LC50 と LC90 はフィニー法を使用して計算されました。

「私たちの仕事は、制度的、国内的、国際的なガイドラインと法律に準拠しています。」

ニンニクの根に定着した 4 つの内部寄生菌株の中で、P. verhagenii が最良の Se-NP 生産者として選ばれました。 選択された株は、従来の方法および ITS 遺伝子の配列決定によって同定されました。 合成された Se-NP は、UV-Vis 分光法、FT-IR、XRD、TEM、DLS、およびゼータ電位分析によって特性評価されました。 抗菌活性、抗酸化作用、癌および正常細胞株に対する in vitro 細胞毒性、および幼虫駆除活性が調査されました。 データは、病原性グラム陽性菌、グラム陰性菌、単細胞真菌をさまざまな濃度と 12.5 ～ 100 μg mL-1 の範囲の MIC 値で処理したため、さまざまな阻害ゾーンを示しました。 フリーラジカル消去活性を、DPPH 法を使用してアスコルビン酸と比較して調査しました。 Se-NP は、31 ～ 87% の範囲の濃度に基づいて、さまざまな DPPH 消去活性を示します。 さらに、Se-NP は、正常細胞、WI38 および Vero と比較して低濃度でがん細胞、MCF7 および PC3 を標的とします。 この発見は、正常細胞への影響を無視することなく、がん治療へのそれらの組み込みを促進します。 さらに、形成されたままの Se-NP は、50 μg mL の濃度で、IV 齢幼虫の死亡率 51%、1 齢幼虫の死亡率 85% の生物医学昆虫であるヒトスジシマカの殺幼虫剤として使用できます。 –1. 得られたデータは、内生菌がさまざまな分野に統合できる活性 Se-NP を作製する高い潜在力を持っていることを確認しました。

現在の研究中に使用および/または分析されたデータセットは、合理的な要求に応じて責任著者から入手できます。 現在の研究の配列は、NCBI (GenBank) (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/OP471232) に寄​​託されました。

セレンナノ粒子

ヒト乳がん

前立腺がん細胞

サル腎臓上皮細胞

ヒト肺線維芽細胞

3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド

2,2-ジフェニル-1-ピクリルヒドラジル

内部転写スペーサー

ジメチルスルホキシド

世界保健機関

最小発育阻止濃度

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この研究を通じて断固たる支援をしていただいたアル・アズハル大学タンタ大学教育病院理学部（男子部）とタンタ大学医学部に感謝いたします。

科学技術イノベーション資金庁 (STDF) がエジプト知識銀行 (EKB) と協力して提供するオープンアクセス資金。 オープンアクセス資金は、エジプト知識銀行 (EKB) と協力して科学技術イノベーション資金庁 (STDF) によって提供されます。

タンタユニバーサル教育病院、タンタ大学、タンタ、エジプト

アブデルラフマン・A・ナッサール

アルアズハル大学理学部植物学微生物学科、ナスル市、カイロ、11884、エジプト

アーメド・M・イード、ホッサム・M・アッタ、アムル・ファウダ

タンタ大学医学部、医療微生物学および免疫学教室、タンタ、エジプト

ワゲイ・S・エル・ナギ

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AMEとAF。 概念化、方法論、検証、形式分析、ソフトウェア、データキュレーション、執筆 - 元の草案、および執筆 - レビューと編集。 A.-RAN; 方法論、検証、形式分析、ソフトウェア、データキュレーション、およびライティング - 原案。 HMA および WSEN。 概念化、検証、リソース、および監督。 著者全員が原稿の最終版の公開を承認しています。

アムル・ファウダ氏への通信。

著者らは競合する利害関係を宣言していません。

シュプリンガー ネイチャーは、発行された地図および所属機関における管轄権の主張に関して中立を保ちます。

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転載と許可

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受信日: 2022 年 11 月 3 日

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公開日: 2023 年 6 月 3 日

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