スペイン北西部アストゥリアスにおけるヒトバベシア症の疫学リスクと血清学的診断に関する遡及研究

寄生虫とベクター 16 巻、記事番号: 195 (2023) この記事を引用

1 オルトメトリック

メトリクスの詳細

バベシア症は、ダニが媒介する人間の病気として世界的に増加しています。 Babesia divergens によって引き起こされる重度のバベシア症がアストゥリアス (スペイン北西部) の 2 人の患者で報告されており、この病気のリスクが検出されていないことが示唆されています。このリスクを分析するために、我々は2015年から2017年までのアストゥリアス州の人口におけるバベシア症の血清有病率を遡及的に評価した。この期間は、これら2件の重篤な症例が発生した中間年をカバーする期間であった。

間接蛍光アッセイ (IFA) とウェスタンブロット (WB) を実施し、マダニ刺咬への曝露を示す症状であるマダニ媒介スピロヘータ Borrelia burgdorferi sensu lato に感染したアストゥリアス州の患者から採取した 120 の血清サンプル中の B. divergens IgG 抗体を検出しました。

IFA の結果によれば、この後ろ向き研究により、B. divergens の血清有病率が 39.2% であることが確認されました。 B. divergens の発生率は人口 100,000 人あたり 7.14 人で、以前に報告された血清有病率を上回りました。 B. burgdorferi slのみに感染した患者と、B. burgdorferi slおよびB. divergensに対するIgG抗体に感染した患者との間で、疫学および危険因子に差は見られなかった。この最後の患者グループは中央アストゥリアスに住んでおり、臨床経過はより軽度であり、WB の結果によれば、B. divergens に対して異なる体液性反応を発現しました。

バベシア・ディバージェンス寄生虫は数年前からアストゥリアス州で流行している。バベシア症の疫学的証拠により、アストゥリアスはこの人獣共通感染症の新たな危険地域となっています。ヒトのバベシア症は、ボレリア症の影響を受けている他のスペインやヨーロッパの地域にも関係している可能性があります。したがって、アストゥリアスおよび他のヨーロッパの森林地域における人間の健康に対するバベシア症の潜在的なリスクには、保健当局が対処する必要がある。

バベシア症は、バベシア属のアピコンプレクサ寄生虫によって引き起こされる新興のダニ媒介性疾患です[1]。

Babesia divergens は、ヨーロッパにおけるヒトおよび牛のバベシア症の主な原因物質です [2、3]。この赤血球内寄生虫は主にマダニによって伝播され、輸血によって伝播するのに必要な特徴も備えています[4、5]。

B. divergens による症候性感染症がヒトに起こることは比較的まれです。発症すると、発熱、貧血、黄疸、ヘモグロビン尿、腎不全などを引き起こします。場合によっては、主に免疫不全患者や高齢患者、特に無脾症の患者において、死亡率の高い劇症疾患に進行することがあります[2]。

ヨーロッパでは本格的な臨床的バベシア症の発生率が低いのとは対照的に、無症候性または低症候性のバベシア抗体を有する人の数はかなりの数に上ります。バベシア IgG の有病率は、さまざまな集団で 2% から 39.7% の範囲であり [6、7、8、9、10]、バベシア感染のほとんどが検出されず、疑われているよりも頻度が高い可能性があることを示唆しています [2、11、12]。これらの未検出の感染症は、ヒトのバベシア症の証拠により、ヨーロッパ地域における献血の安全性に対する潜在的なリスクを示す可能性もあります[2、4、5、9、13]。

スペインではヒトのバベシア症は非常にまれであると考えられていますが、最近の研究では、入院患者におけるバベシア症の発生率が1997年から2019年にかけて増加していることが証明されています（人口1,000万人当たり0.28人/年）。さらに、患者一人当たりの入院費の上昇（6,445.71ユーロ）と、それに伴う死亡率約6.9%（バベシア症総症例数29人中2人が死亡、ただし死亡した患者は2人とも重大な合併症を抱えていた）を伴う[14、15]。

スペイン北西部の北大西洋岸沿いに位置するアストゥリアスは、近年、ヒトのバベシア症の難症例が発生している地域である[16、17]。アストゥリアスの総面積は 10,603.57 km2 で、78 の議会に分かれています。ここはスペイン最大の森林地帯の一つであり、ボレリア・ブルグドルフェリ・センス・ラトによって引き起こされる風土病のライム病や、入院患者の発生率は1997年から人口1,000万人当たり年間0.41人であったヒトのバベシア症など、ダニ媒介性疾患にとって完璧な環境となっている。 2019 年まで [14、18、19、20、21]。

アストゥリアス州で報告されたヒトのバベシア症患者の1人は、免疫機能が正常で健康な46歳の森林警備員にB.ダイバージェンスによって引き起こされた非常に重度の感染症であり[16]、その臨床症状はヨーロッパのバベシア症の「古典的な説明」と一致しなかった。 [1]。この症例と、フランス出身の正常な脾臓サイズを持つ免疫正常な若い人（35歳と37歳）の他の2例[22]は、彼らがこの感染症に対して未知の感受性を持っていたことを示唆しています。別の重症例は、バベシア症で死亡した無傷の脾臓を持つ免疫不全状態のアストゥリアス州の87歳の女性に相当した[17]。

これら 2 件のアストゥリアス州の症例は、根底にヒトのバベシア症がアストゥリアス州で発生しているのではないかという懸念を引き起こしました。したがって、我々は、2015年から2017年にかけて、これらの重篤なヒトバベシア症症例が発生した中間年をカバーする期間である、アストゥリアスの74の評議会におけるヒトバベシア症の血清有病率を遡及的に評価した。

Ixodes ricinus はバベシア症とライム病を媒介するダニ種であるため、我々は、以前にダニ刺咬にさらされたことを示す症状である B. burgdorferi sl IgG 陽性の患者の血清サンプルを検査しました [8]。次に、B. burgdorferi sl のみに感染した患者と、B. divergens 感染の血清学的証拠もある患者の疫学的および血清学的要因を分析および比較し、アストゥリアス州におけるヒトバベシア症の疫学的重要性について議論しました。

この研究には、2015年から2017年までアストゥリアス州（スペイン北西部）の78の議会のうち74の議会に居住していたB. burgdorferi sl IgG陽性患者120人が含まれた。アストゥリアスの4つの沿岸評議会の患者は、ボレリア血清学検査がオビエドのアストゥリアス中央大学病院（HUCA）とは異なる参照病院で行われたため、研究から除外された。

スペイン国家統計局 (https://www.ine.es) によると、表面積 9997 km2 を占める 74 の議会には 2017 年に 658,186 人の住民が住んでいます。これらの議会の人口密度は 65.84 人/人でした。 km2 で、総人口の 66.3%、アストゥリアス全領土の 94.3% を占めました。

この研究の患者は、HUCA またはその地域の関連病院の感染症科、神経科、リウマチ科、または皮膚科の診療科に入院または外部から経過観察を受けていました。

患者の血清サンプルが収集され、ライム病の検査が行われ、HUCA の微生物学サービスで – 80 °C で保管されました。 B. burgdorferi sl IgG 抗体の検出は、自動定性検査 (Vidas、BioMerieux、スペイン、マドリッド) を使用して行われました。結果はイムノブロット (Borrelia IgG IgM EcoLine、Sekisui Diagnostics、リュッセルスハイム、ドイツ) によって確認されました [21]。この研究には、以下の 3 つの陽性血清対照も含まれています: B. ダイバージェンスバベシア症で死亡したアストゥリアス州の高齢患者 [17]、HIV とバベシアダイバージェンスに同時感染し、重度のバベシア症を患ったアストゥリアス州外のスペイン人患者。私たちのグループによって診断され、バベシア症で死亡したB. burgdorferi slとB. divergensに二重感染したフィンランド人患者から診断された[23、24]。以前の研究で検査された、B. microti 陽性のヒト血清プール、マラリア陽性の血清プール、トキソプラズマ症、マラリア、バベシア症などのさまざまな感染症陰性のヒト血清プール [16、17、23、25、 26]をネガティブコントロールとして使用した。 B. burgdorferi sl 血清陽性のサンプル中の B. divergens IgG 抗体を検出するために、社内の間接蛍光アッセイ (IFA) [16、17、23] をわずかに変更して使用しました。我々は、B. divergens (ルーアン 87 株) タンパク質抽出物をターゲットとして使用し、B. divergens に感染した患者における体液性抗体反応を評価する新しいウェスタンブロット (WB) を開発しました。また、B. divergens の主要表面タンパク質 (Bd37) を標的として使用することをベースにした以前の WB をわずかに変更して利用しました [23、27]。

社内 IFA を実行するために、B. divergens (ルーアン 87 株) 感染ヒト赤血球培養物 (25% ～ 30% 寄生虫血症) [28, 29] からの 1 × 107 細胞/ml を 16 ウェルスライドにピペットで移しました (ウェルあたり 10 μl の培養物）（Thermo Scientific、ポーツマス、ニューハンプシャー州、米国）を使用し、37 °C で 30 分間インキュベートしました。次に、スライドを冷 50% アセトン – 50% メタノールで固定し、リン酸緩衝食塩水 (PBS) で 3 回洗浄し、B. burgdorferi sl 血清陽性サンプルおよびコントロールとともに 37 °C で 1 時間インキュベートしました。すべての血清サンプルとコントロールを 3 回繰り返してテストしました。世界保健機関 (WHO) のガイドラインによれば、IFA による血清陰性反応と血清陽性反応の識別に使用されるカットオフ力価は、B. divergens に対して 1:128 に設定されています [6]。結合した抗体は、PBS (Invitrogen、ユージーン、オレゴン州、米国) で 1:200 に希釈したフルオレセインイソチオシアネート結合抗ヒト IgG を使用して検出しました。調製物をウェル当たり５μｌ（ＰＢＳ中２．５μｇ／ｍｌ）のＤＡＰＩ（Ｐｉｅｒｃｅ、米国イリノイ州ロックフォード）で対比染色し、蛍光顕微鏡（ＬｅｉｃａＤＨ２０００ＬＥＤ、Ｗｅｔｚｌａｒ、ドイツ）によって検査した。

インビトロ培養物（30%～40%の寄生虫血症）からのバベシア・ダイバージェンス（ルーアン87株）感染および非感染ヒト赤血球[28、29]を、3倍量のサポニン緩衝液（PBS中サポニン0.15%）に可溶化し、インキュベートしました。 37℃で20分間。次いで、サンプルをＰＢＳを用いて遠心分離により洗浄した。電気泳動の前に、ペレットをプロテアーゼ阻害剤混合物 (Sigma-Aldrich、セントルイス、ミズーリ州、米国) および 2 × Laemmli サンプルバッファー (National Diagnostics、アトランタ、ジョージア州、米国) を含む PBS に再懸濁しました。 Bd37 組換えタンパク質 (GST-rBd37) を生成するために、Bd37 の Asn28 から Phe341 までをコードする B. divergens DNA [27] を PCR によって増幅し、発現プラスミドベクター pGEX-4T1 (GE Healthcare、スウェーデン、ウプサラ) にクローニングしました。メーカーの説明書。大腸菌株 BL21-gold (DE3) plysS (Agilent Technologies、米国カリフォルニア州サンタクララ) を Bd37 発現プラスミドで形質転換しました。次に、100 μg/ml アンピシリン (Sigma-Aldrich) を含む超最適ブロス (SOB) 培地 (250 ml) に、新鮮な一晩形質転換大腸菌株 BL21-gold 株 1 ml を接種し、37 °C で A600 = になるまで増殖させました。 0.5 mM イソプロピル-β-d-チオガラクトピラノシド (IPTG) (Sigma-Aldrich) による誘導前は 0.6。 GST-rBd37 を生成するための 3 時間の誘導後、細胞をペレット化し、プロテアーゼ阻害剤混合物 (Sigma-Aldrich) を補充した B-PER 細菌タンパク質抽出試薬 (Thermo Scientific) に 10 分間再懸濁しました。次に、不溶性物質を遠心分離によって除去し、可溶性画分を使用して、グルタチオン-セファロース4B (GE Healthcare)を製造業者の記載に従って使用することによってGST-rBd37を精製した。 Bd37 のグルタチオン-S-トランスフェラーゼ (GST) 融合パートナー (26 kDa) も、同じ手順に従って生成および精製されました。

Babesia divergens タンパク質抽出物と GST-rBd37 を WB の標的基質として使用しました。非寄生ヒト赤血球タンパク質抽出物およびGST組換えタンパク質も対照として使用した。タンパク質抽出物 30 μg および組換え GST-rBd37 および GST タンパク質 150 ng を 12.5% SDS-PAGE ゲルのウェルごとにロードし、室温、80 mA で 1 時間、Amersham Protran ニトロセルロース膜 (GE Healthcare) に移しました。膜は、0.05% Tween-20 (PBS-T) および 3% (w/v) ウシ血清アルブミン (Sigma-Aldrich) を含む PBS で作られたブロッキング溶液でブロックされ、患者の血清サンプルとともに室温で 1 時間インキュベートされました。対照はブロッキング溶液で 1:128 に希釈しました。次に、メンブレンを西洋わさびペルオキシダーゼ結合抗ヒト IgG (1:10,000 希釈) (Thermo Scientific) で室温で 1 時間処理し、洗浄緩衝液 (PBS + 0.05% Tween-20) で洗浄しました。抗原の検出は、比色反応によって評価されました (CN-DAB 基質キット、Thermo Scientific)。

B. burgdorferi sl および B. divergens に対する IgG 抗体に感染した患者と、B. burgdorferi sl のみに感染した患者において、多様な疫学的および危険因子が評価され、比較されました。一方、カイ二乗検定とフィッシャーの正確なテキストは、必要に応じて、2 つの研究グループ間の比率を比較するために使用されました。ボレリアブルグドルフェリ sl-B. 研究期間中のダイバージェンスの発生率は、B. ダイバージェンス IgG 抗体が検出された各評議会と、研究全体に含まれる 74 の評議会について計算されました。統計計算には、SPSS ソフトウェア v. 25 (IBM Corp.、ニューヨーク州アーモンク) を使用しました。統計的有意性の限界は、両側検定の < 0.05 レベルで確立されました。

バベシアディバージェンス IgG 抗体は、B. ブルグドルフェリ sl に感染した患者からの血清サンプルの 39.2% (47/120) で IFA によって検出されました。同様の結果が、B. ディバージェンスのタンパク質抽出物を使用した WB によっても観察されました。この手法による陽性率は 33.3% でした。血清サンプルにより、サイズが 25 ～ 75 kDa の範囲のさまざまな Babesia divergens タンパク質プロファイルが同定されました。最も頻繁に発生した IgG 抗体反応は、血清サンプルの 47.5% (n = 19) で認識された ≈37 kDa タンパク質に対するもので、次に 48 ～ 63 kDa の範囲の 2 つのより大きなタンパク質が 45% (n = 19) で認識されました。 = 18) それらのうち (表 1; 図 1)。

特異的抗 B 抗体の血清学的検出。ウェスタンブロット (WB) により IgG 抗体を分岐します。パネル a: WB は、B. divergens (Rouen 87) および非感染ヒト赤血球タンパク質抽出物を使用して調製されました。ブロットを、B. burgdorferi sl に感染した患者の血清および陽性および陰性対照とともにインキュベートしました。レーン 1 ～ 40: 患者血清サンプルから同定された、25 ～ 75 kDa の範囲のさまざまな B. divergens タンパク質。タンパク質バンドの数、頻度、サイズ、強度は患者間で異なりました。レーン 41 ～ 47: B. burgdorferi sl に感染した患者からの血清サンプルの一部は、B. divergens タンパク質を認識しませんでした。レーン 48 ～ 53 およびライン C1+、C2+、および C3+: 赤血球タンパク質を認識しなかった血清サンプルと陽性コントロールの一部。約 37 kDa (*) のネイティブ B. divergens タンパク質に対して反応した血清サンプル。約 48 ～ 63 kDa (+) のネイティブ B. divergens タンパク質に対して反応した血清サンプル。パネル b: WB は、組換え GST-rBd37 (Rouen 87) タンパク質と Bd37 の GST 融合パートナーを使用して調製されました。 B. divergens 由来の組換え Bd37 に対する患者の血清の特異性が WB によって観察されました。レーン A および B: それぞれ、SDS-PAGE に供した GST-rBd37 (59.5 kDa) および GST (26 kDa) 組換えタンパク質。レーンの数は、パネル a のどの血清サンプルが GST-rBd37 タンパク質を認識したかを示します。陽性対照 1 (C1+): アストゥリアス州の患者からの血清サンプル [23]。陽性対照 2 (C2+): HIV と B. divergens に同時感染した非アストゥリアス系スペイン人患者からの血清サンプル [25]。陽性対照 3 (C3+): B. burgdorferi sl と B. divergens に二重感染したフィンランド人患者からの血清サンプル。陰性対照（C-）は、トキソプラズマ症、マラリア、バベシア症などのさまざまな感染症に対して陰性のヒト血清プールから構成されました。どの血清も組換え GST タンパク質と反応しませんでした

B. divergens ≈37 kDa タンパク質は、同じく 37 kDa である B. divergens の主要な表面タンパク質である Bd37 とサイズが一致すると考えられます [27]。この仮説を評価するために、我々は対応する組換え GST-rBd37 タンパク質を基質として使用し、WB により陽性血清サンプル中の特異的な Bd37 IgG 抗体を検出しました。

試験した 40 個の血清サンプルのうち、12 個のサンプルは、寄生虫タンパク質抽出物に存在する約 37 kDa タンパク質と GST-rBd37 タンパク質の両方を認識しました。さらに、最初はタンパク質プロファイルに約 37 kDa タンパク質を示さなかった 3 つの血清サンプルが、後に GST-rBd37 タンパク質に対して応答しました (表 1、図 1)。 ≈37 kDa および GST-rBd37 タンパク質に対する抗体は、3 つの陽性対照血清のうち 2 つにも存在し [17, 23]、3 つ目は B. burgdorferi sl と B. divergens の両方に感染した患者からのものであった [24]。は、約48〜63 kDaのタンパク質の1つを認識しました（図1）。ネガティブコントロールまたは赤血球タンパク質抽出物および GST との交差反応性は観察されませんでした。

ウェスタンブロットでは、IFA で検出された陽性血清サンプルの 85.1% が確認されました。さらに、血清サンプルの 32% が Bd37 タンパク質に対する特異的抗体を示しました。

IFA によると、研究期間中に HUCA および地域の関連病院を受診した患者のバベシア症の発生率は人口 10 万人あたり 7.14 人でした。研究した多様な疫学因子および危険因子において、B. burgdorferi sl の単一感染患者と、B. burgdorferi sl および B. divergens IgG 抗体に感染した患者との間に有意差はありませんでした (表 2)。 B. burgdorferi sl 感染および検出可能な B. divergens 抗体を有する患者の年齢中央値は 56.4 歳 (IQ 範囲 45.5 ～ 71.8) でした。これらの患者は軽度の臨床経過をたどっており、その中には既知の免疫抑制症を患っていた 2 人の患者も含まれていた。ほとんど（82.9%、n = 34）がダニ刺されの危険のある屋外活動をしており、一部の人は専門外で動物と接触していました（39.0%、n = 16）。しかし、これらの患者のうち、農業、畜産、漁業の分野で働いていたのは9人だけでした（表2）。 B. burgdorferi sl および B. divergens IgG 抗体に感染したすべての患者は、研究対象となっている 74 のアストゥリアス市議会のうち 22 に居住していました。研究対象となった総人口の3分の1は、220,300人が住むオビエド市議会に居住しており、11人の患者がB.ダイバージェンスIgG抗体を持っていた。残りは自然保護区に囲まれた田舎の議会に住んでいた。

注目すべきことに、バベシア症患者の66%は中央アストゥリアス州の隣接する20の評議会に求心的にグループ分けされており、この広い地域には2人の重篤なヒトバベシア症症例が報告された評議会も含まれている[16、17](図2)。

B. divergens に対する抗体を持った患者の地理的分布。地図は、スペインのアストゥリアスの位置と、2015 年から 2017 年に B. ダイバージェンス感染患者が住んでいたアストゥリアスの市議会を示しています。感染患者の数は各市議会に関連付けられているようです。この地図には、アストゥリアス州で重度 (*) および致死的 (+) のヒトバベシア症症例が発生した市議会も示されています [16、17]。色のブロックは、各議会における人口 100,000 人あたりのバベシア症の発生率の範囲を表します。

2015年から2017年にかけて、少なくとも47人のアストゥリアス州の患者がB. burgdorferi slとB. divergensの両方の感染の血清学的証拠を持っていたが、我々の研究では両方の感染が同時か連続的かは判断できていない。

B. burgdorferi sl に感染した患者における B. divergens 抗体の血清保有率 (39.2%) は、ダニ刺咬歴とダニ媒介性疾患の症状を有するベルギーの患者 199 人で報告された 33.2% と同様でしたが [7]、16.3 ％よりも高かったです。 B.microti-Bの血清有病率%。 B. burgdorferi sl に感染したスウェーデン人 86 人で divergens 抗体が報告されている [8]。

地域の血清有病率の違いにもかかわらず、すべての報告は、バベシア陽性抗体を持つ人の数が、これらの地域から、さらには他のヨーロッパ地域からの臨床診断されたヒトバベシア症症例数を上回っていることを指摘しています[1、2]。しかし、この後ろ向き研究で示されているように、ヒトのバベシア症は医療制度、地域の輸血サービス、監視計画によって気づかれずに通過しています。疑いの指数が低いこと、無症候性バベシア症、および一般的なウイルス様疾患またはライム病との混同がバベシア症を覆い隠す可能性があり、高い血清有病率と低い臨床発生率の間の矛盾を説明できる可能性があります。

実際、私たちが観察したバベシア症の発生率（人口 100,000 人あたり 7.14 人）は、感染の真の発生率を表していません。この値ははるかに高いことが予想されますが、HUCA および HUCA 関連の二次病院で治療を求めた症状のあるライム病患者のみを対象として B. divergens の感染率を研究したため、この値は低く偏っていました。

逆に、診断されていない症候性バベシア症の他の症例がいくつかの理由で見落とされた可能性は非常に低いです。まず、調査対象となった領土はアストゥリアス州の総面積のほぼ 95% を占めていました。この地域は HUCA とその関連地域病院によって衛生的にカバーされており、すべての血清学的測定は HUCA の微生物検査室で集中的に行われます。第二に、HUCA はアストゥリアス州の三次紹介病院です。したがって、重度のバベシア症などの複雑で珍しい症例は、病院治療のために HUCA に転送されます。

この研究では、B. burgdorferi slに感染した患者と、B. divergens IgG抗体も有するB. burgdorferi slに感染した患者との間で分析された多様な疫学的因子および危険因子に有意な差異は見出されなかった。私たちの研究は、バベシア症の疫学が 2 つの感染症に同等に共通していることを示唆しています。ただし、この研究のサンプルサイズが比較的小さいことと、その遡及的な性質により、2 つのグループ間の小さな違いが見落とされている可能性があります。

現時点では、二重感染患者 40 人は、WB による B. divergens に対する抗体反応の異なるパターンを示し、B. divergens (Rouen 87) タンパク質抽出物に存在する Bd37 が広く認識され、組換えタンパク質 (GST-rBd37 Rouen) の形で認識されました。 87）。 Babesia divergens 48-63-kDa 抗原も優勢でした。

注目すべきことに、すべての WB 陽性血清サンプルが Bd37 主要表面抗原に対する特異的抗体を持っているわけではありません。 B. divergens タンパク質抽出物中の Bd37 の認識の不一致も 7 人の患者で観察されましたが、組換えタンパク質の認識では一致しませんでした。ヒトに感染する B. divergens 株の大きな遺伝的多様性 [2]、株間の Bd37 タンパク質内の多型 [30]、さらには各患者の個別の体液性免疫応答さえも、これらの矛盾を少なくとも部分的に説明できる可能性があります。 WBには.divergens Rouen 87株を使用しました。

興味深いことに、B. divergens タンパク質抽出物中の Bd37 を認識しなかった 3 つの血清サンプルは、組換え GST-rBd37 タンパク質を認識できました。バベシアディバージェンスタンパク質抽出物と比較した WB で使用される組換え GST-rBd37 タンパク質の量、品質、純度は、特に患者の血清中の抗体レベルが低い場合に、Bd37 に対する特異的 IgG 抗体の検出に有利である可能性があります。

また、WB システムは、IFA 陽性患者のうち 7 人の体液性反応を判定できませんでした。上で論じたように、B. divergens 株の遺伝的多様性は、陰性の WB 結果を説明する可能性があり、感度と特異性の観点から血清学的結果を改善するには、可能な限り異なる B. divergens 株を使用することが便利である可能性があることを示唆しています。

B リンパ球とその抗体産生はバベシア症感染の根絶に特に重要ですが [31]、バベシア症の重症度が異なる段階の患者で誘発される体液性免疫応答についての情報はまだほとんどありません。

私たちの知る限り、B. divergens に対する体液性反応は少数の患者で分析されています。 2 人の患者の時系列的な体液性反応は、入院後最初の数日以降 36 kDa 抗原に対する一定の反応と、B 投与後数日から数か月の間に 37 kDa のタンパク質を含む他の抗原に対する進行性反応で構成されていました。診断が異なる[28]。 33 kDa および 37 kDa のバベシアダイバージェンスタンパク質も、ダニ咬傷歴のある 2 人の飼育者からの血清サンプルを使用した WB によって検出されました [32]。 B. divergens に対する体液性反応に関する研究では、HIV 感染患者の血清中に組換え Bd37 タンパク質に対する B. divergens IgG 抗体が存在することも明らかになりました [23]。

しかし、これらの特定の抗体レパートリーが患者間で類似しているのか異なるのか、またそれらが B. ダイバージェンスに単独感染した患者および B. ダイバージェンスに同時または連続感染した患者における体液性防御免疫応答の有効性と疾患の転帰を調節できるかどうかはまだ不明です。 .ブルグドルフェリSL

他のバベシア種によって引き起こされる感染症[33、34]に関しては、B. divergens および B. burgdorferi sl による単回および二重感染時の体液性免疫反応を評価し、防御抗体の産生を誘発する抗原を同定するために追加の研究が必要である。あるいは、健康と思われる献血者が無症候性の感染症を患っているかどうか、あるいは患者が急性、慢性、または過去にバベシア症を患っていないかどうかを判断することもできます。

この研究の限界には、古い医療記録からのデータ収集など、遡及研究に関連する限界が含まれます。私たちの知る限り、私たちの研究のサンプルサイズは、B. burgdorferi sl と B. divergens の二重感染に関してこれまでに発表された最大のものでした。ただし、タイプ II エラーを引き起こす 2 つの比較グループ間の微妙な統計的差異を検出するには十分な大きさではなかった可能性があります。また、バベシア症の無症候性または有症状性のすべての人が医療を受けているわけではないため、感染の実際の発生率は私たちの研究では確実に過小評価されています。しかし、血清学的研究が単一の研究室に集中化されているため、これらの感染症が疑われる患者が見逃されることはありません。

同様のシナリオがスペインの他の地域 [14] やヒトのバベシア症 [2] の影響を受けており、血清有病率の研究が望ましい他のヨーロッパ地域でも発生する可能性があります。

この研究では、ライム病血清陽性患者におけるヒトバベシア症の血清有病率、疫学、危険因子を評価し、アストゥリアスの特定の期間におけるB. divergensの位置を特定した。

B. burgdorferi sl に感染した患者からバベシア症の高い血清有病率が検出されたことは、B. divergens がアストゥリアス州で数年間にわたって循環していた可能性があり、人間の健康に脅威をもたらす可能性があることを明らかにしています。

B. burgdorferi sl に単独感染した患者と B. divergens 感染の血清学的証拠もあった患者の間で分析された多様な疫学的要因と危険因子の間に差異は観察されませんでした。

しかし、患者は B. divergens に対して異なる抗体反応パターンを示しました。この結果は宿主防御に関連している可能性があり、特定の B. divergens 抗原に対する個々の体液性反応の特徴付けに向けた将来の研究の基礎となります。

アストゥリアス州はバベシア感染の自然条件を満たしているため、無症候性から重篤な感染症までの新たなバベシア症患者の出現が今後数年間に予想されます。さらに、アストゥリアスの国民が B. divergens に曝露されているという明らかな証拠があり、これは地域社会の健康や輸血感染バベシア症に対するリスクを伴う可能性があります。

このバベシア症の地域的な疫学的証拠により、アストゥリアスはこの人獣共通感染症の新たな危険地域となっています。ヒトのバベシア症は、スペインやヨーロッパの他の地域でも関連する可能性があります。したがって、ダニ媒介性疾患の血清有病率、早期診断、血液スクリーニングを評価し、将来の制御戦略を開発するには、健康監視計画が望ましいと考えられます。

この研究中に生成または分析されたすべてのデータは、この公開記事に含まれています。

B. divergens の主要表面タンパク質

4',6-ジアミジノ-2-フェニリンドール

グラム

カイ二乗検定

自由度

グルタチオン-S-トランスフェラーゼ

Bd37組換えタンパク質

ヒト免疫不全ウイルス

時間

アストゥリアス中央大学病院

間接蛍光アッセイ

免疫グロブリンG

イソプロピル-β-d-チオガラクトピラノシド

キロダルトン

平方キロメートル

ミリアンペア

マイクログラム

P値

リン酸緩衝生理食塩水

0.05% Tween-20 を含む PBS

超最適スープ

ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動

マン・ホイットニーの U 検定

ウエスタンブロット

世界保健機関

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健康なボランティアドナーからヒト A+ 血液を提供していただいたマドリッド輸血センターに感謝いたします。また、図のフォーマットについては、Daniel Luque 博士に感謝いたします。

資金は、スペインのカルロス III 健康研究所からの助成金 (EM および LGM への PI20CIII-00037) によって提供されました。

寄生虫学参考研究室、国立微生物学センター、カルロス 3 世保健研究所、マハダオンダ、28220、マドリッド、スペイン

エストレーラ・モンテロ、ベレン・レブエルタ、ルイス・ミゲル・ゴンザレス

オビエド大学医学部、オビエド、スペインのアストゥリアス中央大学病院、感染症科

マリア・フォルゲラス

オビエド大学医学部、オビエド、スペイン、アストゥリアス中央大学病院、微生物学サービス

メルセデス・ロドリゲス・ペレス

アストゥリアス公国保健研究所 (ISPA)、オビエド、スペイン、感染症トランスレーショナル研究グループ研究員

ローラ・ペレス＝リス＆ハビエル・ディアス・アリアス

内科、Alvarez-Buylla Hospital、ミエレス、アストゥリアス、スペイン

マリア・ミーナ

ヘルシンキ大学メディカム細菌免疫学教室、00014、ヘルシンキ、フィンランド

カリタ・ハーパサロ

スペイン、ビスカヤ、ガルダカノ病院、感染症科

フリオ・コラソス

アストゥリアス中央大学病院感染症ユニットおよびアストゥリアス公国保健研究所（ISPA）感染症トランスレーショナル研究グループ、オビエド、スペイン

ビクター・アセンシ

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概念化、EM、VA、LMG 調査、EM、MF、MRP、LPls、JDA、MM、BR、KH、JC、VA、LMG。元の草案の準備、EM、JC、VA、LMG の作成。フィギュアの準備、EM、LMG。レビューと編集、EM、MRP、JC、VA、LMG の執筆。資金提供、LMG、EM すべての著者は原稿の出版版を読み、同意しました。

エストレーラモンテロは、スペイン、マドリードにあるサルードカルロス 3 世研究所の国立微生物学センターの上級研究員です。彼女の主な研究対象には、バベシアとヒトバベシア症の分子的、臨床的、疫学的側面が含まれます。

エストレージャ・モンテロへの対応。

この後ろ向き研究は、スペイン、マドリッドのInstituto de Salud Carlos IIIの研究倫理委員会によって倫理的に承認されており（参照CEI PI 59_2022）、患者からの同意を求める正式な免除も認められている。健康なドナーからのヒト A+ 血液は、B. divergens の培養を維持するために使用されました (Rouen 87)。血液とそのプロトコルは、スペインのマドリッドにある輸血センターによって使用が承認されました。

著者らは競合する利害関係を宣言していません。

シュプリンガーネイチャーは、発行された地図および所属機関における管轄権の主張に関して中立を保ちます。

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転載と許可

Montero, E.、Folgueras, M.、Rodriguez-Pérez, M. 他スペイン北西部アストゥリアスにおけるヒトバベシア症の疫学リスクと血清学的診断に関する遡及研究。寄生虫ベクター 16、195 (2023)。 https://doi.org/10.1186/s13071-023-05817-x

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受信日: 2023 年 2 月 20 日

受理日: 2023 年 5 月 21 日

公開日: 2023 年 6 月 9 日

DOI: https://doi.org/10.1186/s13071-023-05817-x

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スペイン北西部アストゥリアスにおけるヒトバベシア症の疫学リスクと血清学的診断に関する遡及研究